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產地 | 進口、國產 |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3758 |
用途 | 公司產品僅用物科研 |
包裝規格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
嗜血桿菌PCR檢測試劑盒說明書 | Haemophilus influenzaePCR | BKP3758 |
技術服務內容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
特點優勢:
1. 特異性:嗜血桿菌PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析,經過GenBank及自建龐大數據庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段,可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現性:該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證,重現性為100%。
3. 靈敏性:該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優勢2:該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
腸粘膜上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)D-葡萄糖醛酸-r-內酯,英文名或英文縮寫:D-Glucurone,級別:BR,98%,規格:1克
人海馬神經元 人細胞,NCI-H226[H226]細胞 P388D1(瘤細胞)(S)-(+)-同洛芬 (S)-(+)-Kqtoprofqn 161-81-2
人色素瘤細胞;A875L-溶血卵鱗脂(冷藏運輸) Lysophosphctidylcholinq 9008-30-4
AXL Others Mouse 小鼠 Axl Kinase 人細胞裂解液 (陽性對照) CAPSOFREEACIDCAPSO超級25G73463-39-5RT
大鼠腦細胞;C64975-73-9N,N’-二環己基-4-嗎啉脒N,N'-Dicyclohexyl-4-morpholinecarboxamidine
人顱骨造骨細胞 (HCO) ( 5×105 ) NRK-52E,大鼠腎細胞 Rattus芴甲氧羰酰氯(Fmoc-Cl)Fmoc chloride質量規格:用于HPLC衍生化,≥99.0% (HPLC)
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-B5氟羅里硅土(農殘級)Florisil®質量規格:農殘級
人小腦顆粒細胞 (HCGC)( 5×105 )合成硅酸鎂吸附劑(250-125um)Magnesium silicate adsorbent(Synthetic)質量規格:250-125um
Ⅱ型肺泡上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)吡氟禾草靈標準溶液(0.101mg/ml)Fluazifop-P-butyl solution質量規格:0.101mg/ml
人髓母細胞瘤細胞;D341Med 大鼠子宮內膜上皮細胞完全培養基 100mL惡唑酮菌(標準品) Famoxadone solution質量規格:分析標準品,98.5%
嗜血桿菌PCR檢測試劑盒說明書人胚胎成纖維樣細胞;HEH2 人子宮成纖維細胞完全培養基 100mL2'-脫氧鳥苷-3'-單1酸二鈉2'-Deoxy-3'-guanylic acid di salt質量規格:>98%,BR
人表皮角質細胞-新生HEK-nN-乙酰-DL-甲硫氨酸N-Acetyl-DL-mine質量規格:0.99
RK2 Others Rat 大鼠 kB / RK2 人細胞裂解液 (陽性對照) DL-高半胱氨酸DL-Homocysteine 質量規格:0.95
大鼠直腸平滑肌細胞完全培養基 100mL間氟-DL-酪氨酸m-Fluoro-DL-tyrosine 質量規格:0.99
BHK-21 [C-13]倉鼠腎成纖維細胞 BHK-21 [C-13] hamster kidney fibroblast cells MEM培養基10%FBS鈣蛋白酶抑制劑I(進口)Calpain Inhibitor I(ALLN) 質量規格:≥95%,美國進口
tTA基因修飾的小鼠(B類);P19-CAG-tTA-1D3 膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL3'-對羥基紫杉醇質量規格:美國進口3'-p-Hydroxy Paclitaxel
SK-MEL-1, 人皮膚色素瘤細胞 Human紫杉醇-d5質量規格:美國進口Paclitaxel-d5
BCHE Others Human 人 BCHE / CHE1 人細胞裂解液 (陽性對照) 7-差向紫杉酚質量規格:美國進口7-epi-Taxol
人小氣道上皮細胞RNAHSAEpiC miRNA5 μg紫杉醇C質量規格:美國進口Paclitaxel C
SEMA5A Others Human 人 SEMA5A / Semaphorin-5A / SEMAF 人細胞裂解液 (陽性對照) 2'-O-(tert-Butyldimethylsilyl)-6α-羥基-7-差向-紫衫醇質量規格:美國進口2'-O-(tert-Butyldimethylsilyl)-6α-hydroxy-7-epi-paclitaxel
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。