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產地 | 進口、國產 |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3806 |
用途 | 公司產品僅用物科研 |
包裝規格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
高致病性豬生殖與呼吸綜合癥病毒PCR檢測試劑盒說明書 | Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus(PRRSV)RTPCR | BKP3806 |
技術服務內容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
特點優勢:
1. 特異性:高致病性豬生殖與呼吸綜合癥病毒PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析,經過GenBank及自建龐大數據庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段,可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現性:該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證,重現性為100%。
3. 靈敏性:該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優勢2:該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
HA Others H8N4 甲型 H8N4 (A/piail duck/Alberta/114/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) D-MANNOSED-甘露糖*
Hep G2, 人細胞系2-安基本酚 2-cminophqnol 92-22-6
CD3D & CD3E Others Mouse 小鼠 CD3D & CD3E Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照) M9MEDIUMBROTH,POWDERM9培養基肉湯生物技術級500GRT
人胚腎上皮細胞系;KiMA細胞色素C1克RT
KP-N-NS細胞,人腎上腺神經母細胞瘤細胞() 小鼠細胞,P3/NSI/1-Ag4-1[NS-1]細胞 CL-0397NCI-H23(人非小細胞細胞)5×106cells/瓶×213922-41-31-基硼酸1-Naphthylboronic acid
大鼠肺平滑肌細胞完全培養基 100mL苔酚葡萄糖苷;地衣二醇葡萄糖苷(標準品)Orcinol glucosid質量規格:HPLC≥97%,標準品
C6/36細胞,蚊子細胞 A-704(人細胞) 非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS5A;Vero-HCV-NS5A短葶山麥冬皂苷C(標準品)Liriope muscari baily saponins C質量規格:HPLC≥98%,標準品
NRG1 Protein Canine 重組狗 NRG1-alpha 蛋白 (ECD)百兩金素A(標準品)Ardisiacrispin A質量規格:HPLC≥98%,標準品
L-O2(人正常肝細胞) 5×106cells/瓶×2 角膜上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)柳穿魚黃素(標準品)Pectolinarigenin質量規格:HPLC≥98%,標準品
腎系膜細胞培養基MCM-prf瓜子金皂苷己(標準品)Polygalasaponin F質量規格:HPLC≥98%,標準品
高致病性豬生殖與呼吸綜合癥病毒PCR檢測試劑盒說明書EB病毒轉化的人B細胞(彝族);HYLD-鹽酸伐昔洛韋D-Valacyclovir Hydrochloride質量規格:美國進口
大鼠肝細胞瘤;H4-II-E-C3 腺癌細胞,CW-2細胞 R1610細胞,中國倉鼠倉鼠肺細胞伐昔洛韋雜質FValacyclovir Impurity F質量規格:美國進口
BPH-1, 人細胞 Human4,5-二氯熒光素(>98%,BR)4,5-Dichlorofluorescein質量規格:>98%,BR
ICOSLG Others Human 人 ICOSLG / B7-H2 / ICOSL / CD275 人細胞裂解液 (陽性對照) 對乙氧基苯(>98%,BR)4-Ethoxybenzaldehyde質量規格:>98%,BR
滑膜細胞培養基SM4-羥基(>98%,BR)4-Hydroxycoumarin質量規格:>98%,BR
MN-c, 小鼠皮質神經元 Mouse藜蘆醛shēng huà shì jì容量:100克
T Others Human 人 ansthyretin / T / Prealbumin / PALB 人細胞裂解液 (陽性對照) 三溴酚 2,4,6-Tribromophqnol 118-79-6
人臍平滑肌細胞cDNAHUVSMC cDNA西蒙氏檸檬酸鹽培養基shēng huà shì jì容量:2~8℃50毫升
TSPAN8 Others Human 人 TSPAN8 / Teaspanin 8 / TM4SF3 人細胞裂解液 (陽性對照) 甲基-β-環糊精shēng huà shì jì容量:100克
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化);PC-12(低分化)135-55-72-羥基-7-磺酸鈉wo7ium 2-naphthol-7-sulfonate
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。