![]() |
產地 | 進口、國產 |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3842 |
用途 | 公司產品僅用物科研 |
包裝規格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
人病毒33PCR檢測試劑盒說明書 | Human Papillomavirus 33(HPV33)33 PCR | BKP3842 |
技術服務內容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
特點優勢:
1. 特異性:人病毒33PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析,經過GenBank及自建龐大數據庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段,可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現性:該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證,重現性為100%。
3. 靈敏性:該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優勢2:該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
MET Others Human 人 c-MET / HGFR (aa 956-1390) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) EDTA四鈉鹽,英文名或英文縮寫:EDTA tetrawo7ium salt,級別:BR,98%,規格:10克
CL-0364HuT 78(人T細胞細胞)5×106cells/瓶×2四甘醇 Bis[2-(2-xy7noxyqthoxy)qthyl] qtqr 11-60-7
HSC-T6, 大鼠肝星狀細胞系 人絨癌細胞VP16耐藥株TNFa轉染,JEG-3/VP16-TNFa細胞 7F2(小鼠雜交瘤細胞)本亞磺酸鈉,英文名或英文縮寫:Benzenesulfinic acid wo7ium salt,級別:高,99%,規格:500ul*100支
人細胞;A-427 [A427]二乙?;?,英文名或英文縮寫:2,4-Pentanedione,級別:BR,規格:2克
CD7 Others Mouse 小鼠 CD7 人細胞裂解液 (陽性對照) PEG400 200g Sigma分裝
SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-1全氟辛酸(分析標準品, 用于環境分析)Pentadecafluorooctanoic acid質量規格:分析標準品, 用于環境分析
IFNA5 Others Human 人 IFNαG / IFNaG / Ierferon alpha-G 人細胞裂解液 (陽性對照) 正辛酸(分析標準品,≥99.9%(GC))n-Octanoic acid質量規格:分析標準品,≥99.9%(GC)
豚鼠皮膚細胞;GP-S2蓖麻油酸(分析標準品,99%)Ricinoleic acid質量規格:分析標準品,99%
IFNA14 Others Mouse 小鼠 IFNA14 / Ierferon alpha-14 人細胞裂解液 (陽性對照) 硬脂酸(分析標準品,≥99.5%(GC))Stearic acid質量規格:分析標準品,≥99.5%(GC)
CL-0093HCC1937(人癌細胞)5×106cells/瓶×2甜蜜素(標準品) Cyclamate質量規格:分析標準品
人病毒33PCR檢測試劑盒說明書5-8F, 人高轉移細胞系(6S)-四氫-L-二硫酸生物蝶呤(6S)-Tetrahydro-L-biopterin Disulfate質量規格:美國進口
白介素-2轉染耐VP16絨癌細胞;JEG-3/VP16-IL-2 大鼠腸內皮細胞完全培養基 100mL(6S)-四氫-L-硫酸生物蝶呤(6R)-Tetrahydro-L-biopterin Sulfate質量規格:美國進口
組織源性原代細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)/1ml7,4'-二羥基黃酮(標準品)7,4'-DIHYDROXYFLAVONE質量規格:供含量測定用
PILRA Others Human 人 PILR-alpha / PILRA 人細胞裂解液 (陽性對照) 千金子素L1(標準品)Euphorbiasteroid質量規格:供含量測定用
小鼠;P19異型南五味子丁素(標準品)heteroclitin D質量規格:含量測定
人細胞;PC-3 [PC3]wo7iumD-pantothenate右旋泛酸鈉100克CP,97.5%
PDE1C Others Human 人 PDE1C 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 二硫化鉬 Molybdenum disulfide,99% 1317-33-5 100G 通用試劑
人海馬神經元G,D,X-401 GDX-401
RLFs, 大鼠 R1000細胞 WISH(羊膜細胞)D-白酸,英文名或英文縮寫:D-Leucine,級別:BR,99%,規格:5克
人結直腸腺癌細胞;LoVo16872-11-0四扶硼酸Fluoroboric acid
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。