人抗白蛋白抗體ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)方法
發(fā)表時(shí)間:2025-03-12
在樣本處理完畢后,即可進(jìn)入正式的ELISA檢測(cè)步驟。首先,將處理好的樣本和標(biāo)準(zhǔn)品分別加入預(yù)先包被有白蛋白的96孔板中,每個(gè)孔中加入的體積需嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作,以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。隨后,輕輕晃動(dòng)孔板,使樣本或標(biāo)準(zhǔn)品均勻覆蓋孔底,然后置于37℃恒溫箱中孵育一段時(shí)間,讓抗體與白蛋白充分結(jié)合。
孵育結(jié)束后,取出孔板,棄去孔內(nèi)液體,并用洗滌液反復(fù)洗滌數(shù)次,以去除未結(jié)合的抗體和雜質(zhì)。洗滌完畢后,向每個(gè)孔中加入酶標(biāo)二抗,同樣置于37℃恒溫箱中孵育。酶標(biāo)二抗能夠與已結(jié)合在白蛋白上的抗體特異性結(jié)合,為后續(xù)的顯色反應(yīng)做準(zhǔn)備。
孵育結(jié)束后,再次洗滌孔板,然后加入顯色底物。在酶的作用下,顯色底物會(huì)發(fā)生顏色變化,且顏色深淺與樣本中抗白蛋白抗體的含量成正比。因此,通過觀察顏色變化并測(cè)定吸光度值,即可間接反映樣本中抗白蛋白抗體的含量。
最后,使用酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)下測(cè)定各孔的吸光度值,并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過對(duì)比樣本的吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可計(jì)算出樣本中抗白蛋白抗體的具體濃度。
整個(gè)檢測(cè)過程需嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件,避免污染和誤差,以確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。