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人肺腺癌耐藥細胞株A549/DDP 細胞計數(shù)

發(fā)表時間:2021-01-11

人肺腺癌耐藥細胞株A549/DDP 細胞計數(shù):

1.蓋好蓋玻片:取一套血球計數(shù)板,將特制的蓋玻片蓋在血球計數(shù)槽上。

2.制備計數(shù)用的細胞懸液:用吸管吸5滴細胞懸液到一離心管中,加入5滴臺盼藍染液(0.4%)或苯胺黑,活細胞不會被染色,加入染液后就可以在顯微鏡下區(qū)別活細胞和死細胞。

3.將細胞懸液滴入計數(shù)板:將待測細胞懸液吹均勻,然后吸取少量懸液沿蓋片邊緣緩緩滴入,要保證蓋片下充滿懸液,注意蓋片下不要有氣泡,也不能讓懸液流入旁邊槽中。

4.統(tǒng)計四個大格的細胞數(shù):將血球計數(shù)板放于顯微鏡的低倍鏡下觀察,并移動計數(shù)板,當看到鏡中出現(xiàn)計數(shù)方格后,數(shù)出四角的四個大鉻(每個大格含有16個中鉻)中沒有被染液染上色的細胞數(shù)目。

5.計算原細胞懸液的細胞數(shù):按照下面公式計算細胞密度:

(細胞懸液的細胞數(shù))/ml= ( 四個大格子細胞數(shù)/4) ×2×104

說明:公式中除以4因為計數(shù)了4個大格的細胞數(shù)。

公式中乘以2因為細胞懸液于染液是1:1稀釋。

公式中乘以104因為計數(shù)板中每一個大格的體積為:

1.0mm(長)×1.0mm(寬)×0.1mm(高)=0.1mm3 而 1ml=1000mm3


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