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人肺癌細(xì)胞/5Fu耐藥株;A549-5Fu操作具體步

發(fā)表時(shí)間:2021-01-15

人肺癌細(xì)胞/5Fu耐藥株;A549-5Fu操作具體步驟:

一. 水的制備:

細(xì)胞培養(yǎng)用水必須非常純凈,不含有離子和其他的雜質(zhì)。需要用新鮮的雙蒸水、三蒸水或純凈水

二.PBS的制備與消毒(也可用于其它BSS,如:Hanks,D-Hanks液的配制):

1.溶解定容:將藥品(NaCl 8.0g,KCl 0.2g,Na2HPO4·H2O 1.56g,KH2PO40. 2g )倒入盛有雙蒸水的燒杯中,玻璃棒攪動(dòng),充分溶解,然后把溶液倒入容量瓶中準(zhǔn)確定容至1000ml,搖勻即成新配制的PBS溶液。

2.移入溶液瓶?jī)?nèi)待消毒:將PBS倒入溶液瓶(大的吊針瓶)內(nèi),蓋上膠帽,并插上針頭放入高壓鍋內(nèi)8磅消毒20分鐘。注意高壓消毒后要用滅菌蒸餾水補(bǔ)充蒸發(fā)掉的水份。

三. 胰蛋白酶溶液的配制與消毒:

胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對(duì)胰酶的作用反應(yīng)不一樣。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān),在pH為8.0、溫度為37℃時(shí),胰酶溶液的作用能力*。使用胰酶時(shí),應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間,以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質(zhì)克降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液時(shí)應(yīng)選用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。終止消化時(shí),可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對(duì)細(xì)胞的作用。

1.稱(chēng)取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液濃度為0.25%,用電子天平準(zhǔn)確稱(chēng)取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水(若用雙蒸水需要調(diào)PH到7.2左右)或PBS(D-hanks)液中。攪拌混勻,置于4℃內(nèi)過(guò)夜。

2.用注射濾器抽濾消毒:配好的胰酶溶液要在超凈臺(tái)內(nèi)用注射濾器(0.22微米微孔濾膜)抽濾除菌。然后分裝成小瓶于-20℃保存以備使用。


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